Actividad: Observación de la mitosis en células meristemáticas de la raíz de cebolla


Objetivo. Hacer una preparación microscópica de células meristemáticas de la raíz de cebolla para localizar y diferenciar con el microscopio las distintas fases de la mitosis o cariocinesis.
Material. Cebollas, microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, lanceta, aguja enmangada, pinzas de madera, pinzas de punta fina, palillos, mechero, tijeras, papel de filtro, vaso de precipitados, vidrio de reloj, orceína A y orceína B.

Introducción (Para realizar este apartado se ha utilizado información procedente del libro Biología de 2º de bachillerato de la editorial SM.)

La división celular es el fenómeno citológico por el que una célula origina dos células hijas, cada una de las cuales recibe idéntica información genética. Consta de dos etapas: la cariocinesis o mitosis que asegura el reparto equitativo del material hereditario y la citocinesis o división del citoplasma.

El significado biológico de la mitosis es asegurar la conservación del patrimonio hereditario nuclear en el proceso de formación de un individuo adulto a partir de una célula inicial o cigoto.

La mitosis consta de las siguientes etapas: profase, metafase, anafase y telofase.

Antes de la profase hay una interfase, durante la cuál se produce la duplicación del material hereditario, con lo cual los cromosomas están formados por dos cromátidas unidas mediante el centrómero.

Profase. Se produce una condensación de la cromatina, con lo que los cromosomas comienzan a hacerse visibles. Los centríolos, que se han duplicado durante la interfase, comienzan a separarse hasta situarse en polos apuestos de la célula; conforme se separan se forma entre ellos un conjunto de microtúbulos que constituyen el huso acromático o huso mitótico. La membrana nuclear y el nucléolo desaparecen, y los cromosomas se dispersan por el citoplasma.

Metafase. Los cromosomas alcanzan el máximo grado de condensación, el huso acromático se ha formado completamente y los cromosomas se sitúan en el plano medio del huso acromático, donde forman la placa ecuatorial o metafásica; la unión entre los cromosomas y los microtúbulos del huso acromático se hace por medio del centrómero.

Anafase. Se inicia la separación de las dos cromátidas de cada cromosoma, que emigran hacia polos opuestos. La separación de ambas cromátidas se inicia por el centrómero y de forma sincronizada en todos los cromosomas de la placa metafásica. La anafase termina cuando los cromosomas llegan a los polos.

Telofase. Los nucléolos reaparecen y los cromosomas comienzan a descondensarse, con lo que dejan de ser visibles. La membrana nuclear reaparece alrededor de cada grupo de cromosomas, delimitándose así dos zonas nucleares, una en cada polo de la célula. Las membranas se forman a partir del retículo endoplásmico.

Protocolo

Preparación previa. Tres o cuatro días antes de hacer la práctica se pone un bulbo de cebolla en un vaso de precipitados lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del mismo esté en contacto con el agua. Al cabo de esos tres o cuatro días se habrán formado numerosas raicillas, cuyos ápices se utilizarán en esta práctica. Conviene realizar la práctica cuando las raicillas todavía no han crecido demasiado.

 

1.        Con una tijera se corta el extremo de varias raicillas, procurando que su longitud sea de unos 2 a 3 mm., ya que es en esta zona de la raíz donde se encuentran las células en división.

 

2.        Se depositan los trozos de raíz en un vidrio de reloj, en el que previamente se han vertido de 2 a 3 ml de orceína A, cuya función es la de reblandecer las membranas celulares.

3.        Con ayuda de unas pinzas de madera se calienta el vidrio de reloj a la llama del mechero durante 8 minutos, teniendo gran cuidado de que no entre en ebullición (si es necesario se retirará el vidrio de reloj para que no se produzca la ebullición); el calentamiento termina cuando se observa la emisión de unos tenues vapores.

 

 

 

 

4.        Se coge con las pinzas de punta fina uno de los extremos (ápice) de la raíz y se coloca en un portaobjetos añadiendo una gota de orceína B y se deja actuar durante un minuto. La función de la orceína B es la de completar el proceso de teñido de los cromosomas.

 

5.        Hacer un squash:

  • Sobre el cubreobjetos se colocan unas tiras de papel de filtro, más o menos 5 o 6 trocitos, y luego se presiona suavemente con la yema del dedo pulgar haciendo un giro de más o menos 60º, para así conseguir que las células queden en un solo plano y se elimine el exceso de colorante.
  • Sin necesidad de retirar el papel de filtro se golpea, también suavemente, con el extremo romo de una aguja enmangada o bien con el extremo plano de un lápiz para completar la disgregación de las células meristemáticas.

 

6.        Se observa la preparación con el microscopio empezando con el objetivo de menor aumento para luego utilizar los de mayor aumento.

 

Resultados

Dibujar lo observado a través del microscopio, indicando: número de aumentos con lo que se está trabajando, estructuras observadas y etapas de la mitosis que se han visto.

Cuestiones

1.        En la siguiente fotografía hecha con un microscopio óptico se pueden observar células vegetales en diferentes etapas de la mitosis. Identificar en las células que se encuentran dividiéndose las distintas etapas de la mitosis, poniendo sobre la célula en división una P si es profase, una M si es metafase, una A si es anafase y una T si es telofase. Justifica la  respuesta.

Fotografía obtenida de un ejercicio de las pruebas de acceso a la universidad.

2.        En la siguiente serie de fotografías tomadas de la página web:


       http://www.vcbio.sci.kun.nl/eng/virtuallessons/mitostage/, identificar todas y cada una de las fases de la mitosis que se observan.

 

INFORMACIÓN EN LA RED
http://www.ugr.es/~dpto_gen/fperfect/practicas/pract_mitosis.htm

Página Web del departamento de Genética de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Granada donde se puede encontrar información general sobre la mitosis y en concreto se propone una técnica para poder observar células en mitosis.

http://www.efn.uncor.edu/dep/biologia/intrbiol/mitosis.htm#divisioneu

Página web de la Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales de la Universidad Nacional de Córdoba, Argentina, donde mediante dibujos se explica con detalle las características de la mitosis.

http://fai.unne.edu.ar/biologia/animaciones/index.htm

Página web de la Universidad Nacional del Nordeste de Argentina donde se pueden ver unas cuantas animaciones, mitosis, meiosis, etc.. Una vez dentro de la página haz "clic" en el apartado ciclos biológicos y celulares y luego en mitosis para poder ver una animación de este proceso.

http://biotech-adventure.okstate.edu/low/basics/mitosis/mitosis-animation/

Página en inglés en la que se puede ver una animación de la mitosis en una célula animal.

http://www.cellsalive.com/mitosis.htm

Página en inglés en la que se muestra una animación de la mitosis.

 

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BIEN ZUPER OZEA EM SIRVIO ZIII

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